手动菌落计数器是种统计物品含菌数的有效方法

菌落计数一般采用的是平板菌落计数法,是种统计物品含菌数的有效方法。手动菌落计数器方法如下:将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液涂布到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞;统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。在常规的微生物学实验中,不管是食品卫生细菌学检测,还是药品微生物限度检查,还是研究活性物质的抑菌性能实验,都常常需要对样品中的微生物进行定量或者浓度计算;众多微生物定量方法中最常用的就是对培养后的皮氏培养皿上所生长菌落进行总数统计的菌落总数统计定量方法。 目前,大多数实验室仍采用传统的人工肉眼结合菌落计数器的计数方法:借助放大镜的观察,用计数笔点击每一个菌落,计数器计数每一个点击产生的压力电子脉冲得出总数。这样虽然成本低廉,但有以下几大缺点。1、识别和记数错漏。所有的计数都依靠对压力脉冲产生次数的记录,不同人员的操作产生的压力不同就难免产生漏记,而且计数的结果也因操作人员对菌落的识别经验不同而产生差异,系统偏差较大。2、标记和修正不便。肉眼计数和菌落计数器计数都依靠计数笔在被统计的菌落上留下墨水笔迹来进行标记,因此在存在密集菌落的情况下就标记不便,而且发现误统计时需擦去墨水痕迹导致修正不便。3、效率低下。肉眼计数和菌落计数器计数都需要人工用肉眼识别每一个菌落,因此一旦样品较多就会耗费大量的时间,影响研究或是结果报告的效率。4、原始结果无法保存。在做完统计后,留下了一个统计数字,而对记录和验证实验结果很重要的培养平板表面菌落生长状况却因为平板的洗掉而无法保存。.注意事项:国标法测菌落总数是以检样中的细菌细胞和平板计数琼脂混合后,每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20%),因而并不能测出每g或ml检样中实际的总活菌数,厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长,有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制,因此所得结果,手动菌落计数器只包括一群能在普通平板计数琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。国标法检测应注意以下问题:2.1 所用器皿及稀释液2.1.1 检验中所用玻璃器皿,如培养皿,吸管、试管等必须是完全灭菌的,并在灭菌前彻底洗涤干净,不得残留有抑菌物质。2.1.2 用作样品稀释的液体,每批都要有空白对照。如果在琼脂对照平板上出现几个菌落时,要追加对照平板,以判定是空白稀释液,用于倾注平皿的培养基,还是平皿吸管或空气可能存在的污染。2.1.3 检样的稀释液虽可用灭菌盐水或蒸馏水,但以用磷酸缓冲盐水特别是0.1%蛋白胨水为合适,因蛋白胨水对细菌细胞有更好的保护作用,不会因为在稀释过程中而使食品检样中原已受损伤的细菌细胞导致死亡。如果对含盐量较高的食品(如酱品等)进行稀释,则需采用蒸馏水。2.2 样品稀释2.2.1 检样稀释时,无菌称取(或量取)有代表性的样品25g(或ml)剪碎放于含有225ml灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇作成1:10的稀释液。制备10倍系列稀释的样品匀液时,每一步都应该摇匀试管或反复吹吸,使菌体能够尽量分散均匀。如系肉、鱼等固体样品,最好剪细于灭菌乳钵内与稀释液研匀,或与稀释液同置于灭菌均质器杯中,以8000-10000rpm速度搅拌1分钟,使做成均匀的1:10稀释液。对于像食醋或酸性饮料等酸度较高的样品,如果直接用原样液来检测菌落总数,结果会偏低甚至为0 ,只有严格按标准要求先用灭菌的20-30%碳酸钠溶液将其PH值调至中性后方可准确检测出菌落总数。2.2.2 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,将上述1:10的检样稀释液再做成几个适当的10倍递增稀释液。即取1:10稀释液1ml与9ml稀释液混和做成1:100的稀释液,然后依次递增稀释,做成1:1 000、1:10000等稀释液。注意每递增稀释一次,必须另换1支1ml灭菌吸管,这样所得检样的稀释倍数方为准确。2.2.3 从吸管筒内取出灭菌吸管时,不要将吸管尖端碰着其他仍留在容器内的吸管的外露部分;;而且吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶和试管时,也不要触及瓶口及试管口的外侧部分;因为这些部分都可能接触过手或其他沾污物。2.2.4 在作10倍递增稀释中,吸管插入检样稀释液内不能低于液面2.5cm;吸入液体时,应先高于吸管刻度,然后提起吸管尖端离开液面,将尖端贴于玻璃瓶或试管的内壁使吸。管内液体调至所要求的刻度,这样取样较准确,而且在吸管从稀释液内取出时不会有多余的液体粘附于管外。   2.2.5 当用吸管将检样稀释液加至另一装有9mL空白稀释液的试管内时,应小心沿管壁加入,不要触及管内稀释液,以防吸管尖端外侧部分粘附的检液也混入其中。


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