菌落计数器菌落总数的测定

  菌落是指细菌在固体培养基上GB 4789—2012食品微生物学检验菌落计数器 大肠菌群计数 第二法 大肠菌群平板计数法,6.2.2.2将10 mL~15 mL 冷至45? ℃±0.5? ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)倾注于每个平皿中。小心 旋转平皿,将培养基与样品匀液充分混匀。待琼脂凝固后,再加3 mL~4 mL? VRBA-MUG覆盖平板表层。 凝固后翻转平板,36? ℃±1? ℃培养18 h~24 h。 生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度,与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定,即在需氧情况下,37℃培养48h,能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数,所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以菌落计数器及非嗜中温的细菌,由于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量,它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数,计算出每克(或每ml)原始样品中所含细菌菌落总数。

6.3平板菌落数的选择 

选择菌落数在10 CFU~100 CFU之间的平板,暗室中360 nm~366 nm? 波长紫外灯照射下,计数平板 上发浅蓝色荧光的菌落。  BD- C1型大肠埃希氏菌计数器是北京启航博达科技有限公司生产的一种数字显示式自动细菌检验仪器。检测菌落的同时可以进行计数,上面:6W紫外灯通过窄带滤光片(面积:200X50MM)滤去可见光发出在30cm距离内产生360 nm~366 nm 波长紫外光,强度约为1200 μW/cm2,观察各种有荧光出现的检测结果,下面:由计数器、探笔、计数池,等部分组成,计数器采用CMOS集成电路和高保真语音芯片精心设计,计数时同步语音报读,LED数码管显示,字高13mm,清晰明亮,配合专用探笔,计数灵敏准确。记数池内有荧光灯照明,菌落对比清楚,便于观察。适用于食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数(GB 4789—2012)大肠埃希氏菌平板计数法,使用方便、安全、可靠。 可应用于医疗卫生、食品安全监督、各级疾病控制中心、各级工商、检验检疫、自来水厂、矿泉水厂、饮料厂、海洋监测、质量监督、环境保护等部门

微生物实验室,洗手用水必须是纯化水

微生物限度检查实验室及要求:微生物限度检查实验室用途用于检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染的程度。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

《中国药典》[1] 对微生物限度检查实验室的要求 微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作,防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

微生物限度检查实验室常用仪器设备

仪器设备: 1、净化工作台(垂直流/水平流)2、 恒温培养箱(30~35℃)、3、生化培养箱(23~28℃)、4微波炉、5、匀浆仪(3000~8000 r/min)或康氏振荡器、6、恒温水浴、7、电热干燥箱(100~300℃)、8、、电冰箱、9离心机、10离心管、11微孔滤膜及薄膜过滤器(微生物限度检查仪)、12尘埃粒子计数器( 带打印功能)13浮游菌采样(狭缝式)、14蒸汽灭菌器(使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定)。 15、16显微镜(40×~1500×)、17电子天平或药物天平(感量0.1g),18pH计。

玻璃器皿:1、锥形瓶(250~300ml、500ml内装玻璃珠若干)、2、培养皿(9cm)、3、量筒(100ml,500m1)、4、试管(18mm×180mm)及塞、吸管(1m1分度0.0l,10m1分度0.1)、5、注射器(20ml或30m1)、6、涂布棒、7、注射针头、8、载玻片、9、盖玻片、10、玻璃消毒缸(带盖)、11、不锈钢桶(带盖)。

玻璃器皿用前应洗涤洗干净,吸管、量筒不挂水滴,无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花,置吸管筒内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞,若用振荡器制备混悬液时,尚需用玻璃纸包裹瓶塞,以免振荡时供试液污染瓶塞,再用牛皮纸包扎。玻璃器皿,均于160℃干热灭菌2h或高压蒸汽121℃灭菌30min,烘干备用。

用具 :大、小橡皮头(放于干净带盖的容器中,并应定期用70%~75%乙醇溶液浸泡)。无菌衣、帽、口罩、手套(洗净后配套,用牛皮纸包严)灭菌,备用。也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。

接种环(白铱金或镍铬合金,环径4~5mm、长度6~10cm)、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆、陶瓦盖(12cm)、实验记录纸等


       


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