手动菌落计数器污水微生物检测之菌落计数仪的应用

       一般水体和废水以及污水处理中常见的微生物有:细菌Bacteria,真菌 Fungi,藻类 Aglae,原生动物 Protozoa,轮虫 Rotifers, 甲壳纲动物Crustaceans,虫类 Worms (线虫Nematodes与扁虫Flatworms)。主要的检测项目有细菌总数、酵母菌总数、霉菌总数、大肠杆菌总数等。手动菌落计数器1.细菌总数测定:  1.1生化池水样稀释103倍、104倍、105倍、106倍和107倍后,分别取各稀释液1mL接种于培养皿中,倒平板,于37℃生化培养箱中培养24h后,选取菌落数在30~300个之间的培养物进行计数,每个稀释倍数做5个平行样。 1.2取100mL水样水浴至残留少量水后,于105℃烘箱中烘至恒重,称量水样中活性污泥的干重,计算生化池水样中每克干污泥的细菌总数。 2. 酵母菌总数测定: 2.1生化池水样稀释102倍、103倍、104倍和105倍后,分别取各稀释液1mL接种于培养皿中,倒平板,于30℃生化培养箱中培养48h后,选取菌落数在30~300个之间的培养物进行计数,每个稀释倍数做5个平行样。2.2取100mL水样水浴至残留少量水后,于105℃烘箱中烘至恒重,称量水样中活性污泥的干重,手动菌落计数器计算生化池水样中每克干污泥的酵母菌总数。3.霉菌总数测定:  3.1生化池水样稀释102倍、103倍、104倍和105倍后,分别取各稀释液1mL接种于培养皿中,倒平板,于30℃生化培养箱中培养72h后,选取菌落数在30~300个之间的培养物进行计数,每个稀释倍数做5个平行样。 3.2取100mL水样水浴至残留少量水后,于105℃烘箱中烘至恒重,称量水样中活性污泥的干重,计算生化池水样中每克干污泥的霉菌总数。4.大肠菌群总数测定:  4.1初发酵试验:以无菌操作将各盛有3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液5毫升的5支发酵管内,各接种污水样10毫升,将各盛有单料乳糖蛋白胨培养液约10毫升5支的发酵管内,各接种污水样1毫升,再将各盛有单料乳糖蛋白脏培养液约10毫升的5支发酵管内,各接种1∶10稀释的污水样1毫升(相当于原污水样0.1毫升)。将此15支管已接种的发酵管置于37℃恒温箱内,培养24小时。 4.2平板分离:经培养24小时后,将产酸产气及只产酸不产气的发酵管,分别接种于伊红美兰培养基或品红亚硫酸钠培养基上,置37℃恒温箱培养18~24小时,挑选符合下列特征的菌落,取菌落的一小部分,进行涂片、革兰氏染色、镜检。菌落总数检验工作中会遇到各种实验平板的菌落计数工作,如倾注法平板,螺旋接种平板,3M菌落总数测试纸片,滤膜法平板等。而且人工计数既消耗时间又耗人力,统计随着人的疲劳度而加大,有的工作人员甚至为了减轻工作量草草了事。

自动菌落计数仪具有着不同类型平皿的精确统计功能,能够保存平皿图像和数据库,方面查看验证,分析仪器采用了菌落放大图象拍摄,高分辨率的1000万像素CCD数字成像技术和Colonfast菌落智能识别技术。1. 针对细菌总数测定:在菌落自动计数方面,仪器可以快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、空气沉降法平板、螺旋接种平板、3M纸片的菌落自动计数和浓度计算。自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒,最小可以分辨的菌落直径可达 0.01mm;可构建专用计数模板以适应复杂实验室环境,计数误差控制在10%以内。2. 针对酵母菌和霉菌 迅数菌落分析仪器内置特殊算法,支持对包含霉菌和酵母菌样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、螺旋接种平板的菌落自动计数和浓度计算。3. 针对大肠杆菌自动菌落计数能力可帮助实验人员快速准确选取“菌落数在30到150的VRBA平板”;利用彩色高像素CCD成像及Colonfast图象智能识别软件,迅数菌落仪能迅速识别“紫红色,有沉淀环,且直径不小于0.5毫米”的大肠菌群菌落,只需1秒就计算出大肠菌群典型菌落的菌落数。4. 一些特殊的污水中还存在着高致病性病原微生物,比如枯草芽胞杆菌黑色变种芽孢。检测方法:1)取适量枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢悬液,混入收集罐,使污水中菌液终浓度达到(2~8)×104/mL2)按照污水处理程序依次进行化学消毒和物理消毒。3)将滤膜在蒸馏水中煮沸消毒3次,每次15min;滤器用压力蒸汽灭菌(121℃,20min)。4)检测采样:消毒处理完毕后,用分度吸量管从污水收集罐的采样口吸取100mL待排放的污水,在无菌的条件下用微孔滤膜过滤。5)滤膜用50mL PB缓冲液洗涤,除去残留消毒剂。6)收集洗涤液,在无菌的条件下用微孔滤膜过滤。7)将微孔滤膜在无菌条件下移放置胰大豆琼脂平皿上进行细菌培养。滤膜应与培养基完全紧贴,当中不得留有气泡。8)采样平皿倒置于温箱中35±0.5℃培养24±2 h后,进行枯草杆菌菌落计数。对于滤膜、3M纸片等菌落计数,迅数的Colonfast菌落智能识别技术能够精确识别菌落特征,实现快速自动计数。记者了解到,菌落统计是微生物实验中最普遍的实验之一,“智能菌落计数仪”能够广泛应用在食品、饮料、药品、生活污水等细菌数的检验过程中。“智能菌落计数仪”被城阳区科技局评为“2014年城阳区"区长杯"创新大奖赛”优秀创新奖,而在此之前,该发明也被评为第六届全国三维数字化创新设计大赛中获得山东赛区特等奖,是山东省参赛作品的最高奖项。该仪器申请了两项国家专利,分别是多色光源装置专利和自动菌落计数仪专利。机电系的老师说,在学院硬件软件设施并不强大的条件下做出这样的成绩是很不容易的,最大的希望是让这项设计普及下来,“起初国外的类似设备动辄就是几十万元的价格,我们自主设计出来成本根本没有那么高,我们想把这个设计进行工业普及,可以大大降低市面上此类产品的价格”。在菌落计数仪设计过程中,机电系的学生也从中收获很多,“我把硬件设计让学生来完成,从选择正确方案到理论验证,再到确定仪器尺寸大小和设计出零件图,到把零件制造和组装起来,到最后设备调试阶段,都是学生来完成操作的,老师是在其中进行指导,这样能让学生了解如何系统地完成一个产品的设计,以后学生从事机械方面的工作就可以得心应手了。”除此之外,学生的团队协作能力和设备调配技术也得到锻炼。










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